菌糸を特定するための胞子、菌糸、嚢胞、外傷の顕微鏡検査

菌類の研究に適した複合顕微鏡

以下の情報は、PatO'Reillyの最新の本「FascinatedbyFungi」からの抜粋をまとめたものです。詳細とサンプルページについては、著者が署名したコピーをオンラインで注文できるブックショップを参照してください...(この本には真菌学用語の用語集も含まれており、初心者向けの要約版がここにあります...)

顕微鏡検査と顕微鏡検査

野外で真菌を特定できない場合は、サンプルを家に持ち帰ってさらに調査することをお勧めします。家庭ではできること、現場ではできないことがない限り、そうする意味はありません。顕微鏡による調査は、物事を適切に行うのに十分な時間があれば、屋内で行うのが最適です。この目的のために顕微鏡を選択して使用するためのヒントをいくつか紹介します。

おもちゃの顕微鏡は動植物の構造を見るのに問題ありませんが、真菌学には本当に良い顕微鏡が必要です。これは、菌類の微細構造が非常に小さいためです。光を使用して解決できる限界に近いものもあります。X線の波長は光波の波長よりもはるかに短いため、X線顕微鏡を使用してより詳細に調べることができます。しかし、光学顕微鏡が私たちのほとんどにとって単なる趣味である何かのための高価なツールであると思うなら、範囲の下限のX線顕微鏡のためにあなたの家を再住宅化することさえ考えないでください。

チチタケ属アゾナイトの胞子
油浸顕微鏡レンズを通して見たチチタケ属アゾナイトの胞子

真菌の胞子、担子器、嚢胞、スフェロシスト、および真菌の他の小さな特徴を研究するには、少なくとも400倍の倍率が可能な顕微鏡が必要です。理想的には、最大倍率が1000倍の顕微鏡を選びますが、このような高倍率で適度に鮮明な画像を取得するには、油浸レンズが必要です。

胞子の寸法と装飾(たとえば、とげのある疣贅-左の写真を参照)は重要な識別機能であり、見ているものの寸法を測定できるようにするには、接眼レンズまたはその他の接眼レンズが必要になります校正の手段。顕微鏡に付属の説明書がわかりにくい場合(または、幸運にもハンドブックなしで中古の掘り出し物を手に入れることができる場合)、地元の真菌グループの誰かが、あなたのセットアップと校正を喜んで手伝ってくれるでしょう。システム。

私の顕微鏡は三眼顕微鏡なので、接眼レンズを見ながらカメラアダプターを使うことができます。(ほとんどの場合、コンピューターの画面に転送される画像を観察するだけです。)

その他の「必須」の顕微鏡機能は次のとおりです。

  1. ほとんどの場合、スライドの真下からの調整可能な照明で、明視野照明と呼ばれます。(生物学的機器の場合、暗視野照明も下からですが、直接光が対物レンズに入らないようにする角度です。特別な暗視野コンデンサー、または低倍率の場合は、光路に挿入された黒いストッパーが必要です。)
  2. スライドを保持するメカニカルステージを移動するためのコントロールノブ
  3. 粗いフォーカスコントロールと細かいフォーカスコントロール

化学物質の染色

チャコールバーナーであるRussulacyanoxanthaの茎構造のSphaerocysts
チャコールバーナーとして一般に知られている森林キノコであるRussulacyanoxanthaの茎構造のSphaerocystsは、そのもろさの原因です。この写真は、倍率600倍の顕微鏡で撮影したものです。スライドの茎の素材はコンゴーレッドで染色されていました。

胞子の微細構造や、顕微鏡で見たい菌類の他の小さな部分の多くは、ほぼ完全に半透明です。それらは染色された場合にのみはっきりと見ることができます。同定をさらに支援するために、多くの真菌は、試薬と呼ばれる特定の化学物質と接触すると色が変化する胞子を生成します(胞子がそれらと接触すると反応するため)。真菌顕微鏡で最も一般的に使用される化学物質、染色剤、試薬のいくつかを次に示します。

蒸留水

(はい、古き良きH2O!)小さな被写体を見て自然な色を見たい場合は、水が理想的な湿潤剤です。水道水にはスライドの寿命を制限する可能性のある化学添加物が含まれており、雨水は酸性で同様に問題がありますが、蒸留水は安価で簡単に入手できます。胞子やその他の被写体に付着した小さな気泡による画像の歪みを避けるために、写真用の湿潤剤を一滴加える必要があるかもしれません。(食器用洗剤が効きます!)約10%のグリセリンを加えると、スライドが乾くまでずっと長持ちします。

アンモニア(NH3)

この有用であるが潜在的に危険な化学物質は非常に刺激的な蒸気を放出するため、使用中を除いて常にボトルにしっかりと蓋をする必要があります。(ホームセンターの家庭用アンモニアは問題ありません。)ある種の真菌の色の変化を引き起こす試薬と同様に、アンモニアは特定の他の試薬の成分です。純粋なアンモニアは通常の室温のガスであり、真菌学的用途では蒸留水中の10%溶液が通常の濃度です。それは強いです、そしてそれが目に入るならば、それは深刻な損害を引き起こすでしょう。

硫酸第一鉄(FeSO4)

多くの真菌愛好家や真菌学者は、呈色反応をチェックするために真菌(特に脆い鰓)をこするために、口語的に鉄塩として知られている硫酸第一鉄の結晶をフィールドキットに入れています。医薬品グレードの結晶を購入する費用をかけないでください。園芸用品センターでコケキラーとして販売されているものや、土壌のアルカリ度を下げるためのものは、汚れが安く(おっと!)、同様に機能します。

水酸化カリウム(KOH)

これは、封入剤として(通常は染色剤と一緒に)、また試薬として、フィールドで、またはベースに戻って使用されます。一部のキノコのキャップまたは鰓の表面は、KOHと接触すると劇的に色が変わります。それらは、例えば、種に応じて、黄色、赤、マゼンタ、オリーブ、または黒に変わる可能性があります。したがって、KOHを使用して顕微鏡スライドを作成すると、崩壊から保護されるだけでなく、顕微鏡を介して取得されたサイズと形状のデータと同じくらい識別プロセスに寄与することがある診断呈色反応を誘発する可能性があります。

メルツァー試薬

重要な成分の1つが潜在的に危険な物質である抱水クロラール(デートレイプドラッグ)であるため、この化学物質のカクテルを入手するのは困難です。他の成分は簡単に入手できます–ヨウ素結晶、ヨウ化カリウム、蒸留水。ヨウ素はでんぷん質の物質と反応して濃い青黒色を生成し、でんぷんを含む真菌胞子は「アミロイド」と呼ばれます。英国の真菌グループに参加すると、英国真菌グループ協会(ABFG)からメルツァー試薬を入手できる場合があります。真菌種の胞子は、メルツァー試薬で染色すると診断用の色が変化する場合があります。胞子は次のように呼ばれます:

  1. 彼らが青黒色に変わるならば、アミロイド
  2. 彼らが赤褐色に変わるならば、デクストリノイド
  3. 単に黄色がかった色になるか、まったく変化しない場合は、アミロイド(または陰性)

これらの用語は、各種の化学試験特性をリストしたフィールドガイドで使用されます。

汚れ

ポロニア・プンクタタの子嚢
爪真菌のPoroniapunctataの子嚢

顕微鏡スライドを作成するときに汚れを使用する主な理由は次のとおりです。

  1. 顕微鏡画像のコントラストを高める
  2. 特定の組織構造を強調する

多くの場合、汚れは、対象の材料の腐敗や乾燥を防ぐのに役立つ他の化学物質と一緒に使用されます。

染色剤の例は次のとおりです。

コンゴーレッド

菌糸構造の細部を観察するための優れた汎用ステイン(たとえば、右のAmanita rubescensギルトラマの写真を参照してください。マークされた寸法はミクロン単位です)。粉末として供給され、10%に最もよく溶解します。アンモニア溶液。

サフラニン

赤血球核を生成する別の染色。

ラクトフェノールコットンブルー

これはキチンを染色し、胞子の装飾などの構造が他のほとんどの染色(コンゴーレッドを含む)よりもはるかにはっきりと現れるようにします。

別れのショット-まあ、これは出発を避けることと関係があります。上記の化学物質には、深刻な苛性、酸性、毒性のある物質が含まれているため、子供が手に入れられない場所に保管する必要があります。たとえば、アンモニアからの煙は目を火傷する可能性があります。実際、一部のテストでは、アンモニア蒸気が真菌組織を通過して色の変化を引き起こすだけで済みます。

三眼顕微鏡

安全な金庫は命を救うことができます。顕微鏡を保管しているベンチの隣の壁にボルトで固定しているので(上の写真を参照)、化学薬品、かみそりの刃、スライドガラスなどを保管するのに最適です。

胞子

上:オレンジピール菌Aleuriaaurantiaの胞子

スライドの作成

作成するのが最も簡単なスライドは胞子です。(ここに示されているのは、食料品店やスーパーマーケットで常に入手可能な市販のボタンマッシュルームであるAgaricus bisporusの胞子です。)あなたがしなければならないのは、菌を肥沃な側を下にして顕微鏡スライドに置き、1〜2時間待つことです。

素敵な胞子紋を作成しようとするときとは異なり、すべてを覆う必要はありませんが、私は通常、下に鋭いエッジのガラス片があることを思い出させるために行います。層を重ねるときに胞子の色を決定するのではなく、別々の胞子を見ることができるようにしたいので、密な印刷は必要ありません。したがって、長く放置しないでください。

スライドに胞子のほこりが付着したら、湿潤剤を1滴加えるか(石鹸水で十分です!)、胞子が着色ではなく透明な場合は適切な染色剤を加え、その上にカバーガラスを置きます。メルツァー試薬は、コントラストを改善すると同時に、スライドを光にかざすと、胞子がアミロイド、デキストリノイド、またはイナミロイドのいずれであるかを確認できるため、良い選択です。

スライド-1

真菌組織の非常に薄いスライスからスライドを作成することはより困難であり、成功よりも多くの失敗を期待する必要があります。難しいのは、調査したい機能を含む非常に薄く均一なスライスを作成することです。アガリコイド種の鰓で担子器を研究したいと思うかもしれません-担子器-ステリグマと胞子が運ばれる(通常)クラブ形の菌糸の延長。

鋭利なかみそりの刃を使用して薄いスライバーを切り取るか、針先のピンセットを使用してストリップを引き剥がしたら、プロセスは胞子スライドの場合と同じです。スライド上に標本を置き、ステインを数滴加えてからカバーガラスを追加し、わずかな圧力を加えてセクションを平らにします。優しくしてください。ほとんどのカバースリップの厚さは10分の1ミリメートル強で、非常に簡単に壊れます。吸収性ティッシュを使用して余分な汚れを取り除き、汚れが標本に浸透するまで数分待ちます。

スライド-2

このアプローチのバリエーションは、かなり簡単ですが、ヒットアンドミスのテクニックの方が多く、2つのスライドの間にかなり薄い標本を押しつぶすことです。運が良ければ、興味のあるビットがエッジの1つに噴き出します。前と同じようにステインを使用して、これらのエッジの特徴を強調します。

担子菌を顕微鏡で研究する場合、胞子のサイズや形に制限されません。また、さまざまな種類の嚢胞症を調査することができます。これらは、さまざまな表面から際立っている菌糸構造です。それらが発生する場所に応じて、それらには異なる名前が付けられます:胸膜嚢胞症は鰓面に発生し、cheilocystidiaは鰓縁に発生し、毛包嚢胞症はキャップ表面に発生し、caulocystidiaはキノコの茎に見られるものです。これらの場所のそれぞれの嚢胞の形は異なる可能性があり、これらの違いは、種を区別するのに役立ちます。

Hygrocybechlorophanaの鰓トラマ

上に示した顕微鏡写真は、ゴールデンワックスキャップであるHygrocybechlorophanaの鰓外傷です。巨視的な特徴を調べることによって、すべてのワックスキャップを種レベルで特定できるわけではありません。顕微鏡で検査することによって最もよく判断されるものもあれば、巨視的検査と顕微鏡的検査の両方が必要なものもあります。スライドとカバースリップの間にある小さな鰓材料(鰓外傷)を押しつぶすと、組織の構造を調べることができます。菌糸が織り交ぜられているものもあります。規則的なもの(菌糸が互いに平行にある)と規則的でないもの(2つの間のどこか)があります。ここでは、Hygrocybe chlorophanaの長い細胞がはっきりと見えますが、たとえばHygrocybe miniata(バーミリオンワックスキャップ)の菌糸細胞ははるかに短いです。

顕微鏡写真の悲惨さを軽減するソフトウェア

胞子やその他の真菌組織の断片を顕微鏡で写真に撮ろうとしたことがあれば、すべてに焦点を合わせることがいかに難しいかがわかるでしょう。一部がシャープになり、残りはぼやけます。この問題は、高倍率で利用できる被写界深度が非常に限られていることが原因です。スペシャリストでありながら安価なソフトウェアが役に立ちます。組織サンプルにさまざまな深さで焦点を合わせた複数の画像を撮影し、ソフトウェアはさまざまな画像の焦点の合った部分を使用して画像を作成します。Mycocam4と呼ばれるプログラムを使用すると、真菌の胞子の測定がはるかに簡単になります。菌類学者のRichardShotboltによって作成され、www.shotbolt.comから無料でダウンロードできます。使い方は非常に簡単です。

顕微鏡検査は専門分野であり、菌類に関心のあるすべての人が関与したいとは思わないものです。この分野の詳細については、専門家のテキストがあり、顕微鏡の選択と設定に役立つ、ブルネルなどの信頼できる独立したサプライヤーのWebサイトがあります。顕微鏡は良い出発点です。通常、訪問を手配して特定のニーズについて話し合い、いくつかの代替案を試すことができます。

私たちの真菌種のページの多くには、デジタルカメラ付きの顕微鏡を使用して撮影された胞子写真の例があります。たとえば、興味深い胞子の装飾があるLaccariabicolorを参照してください。そして、Cuphophyllus pratensisは、楕円形または涙形から亜球形の胞子を持っています。


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